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Protocolos de congelación de óvulos

Laura Gil Aliaga
Laura Gil Aliaga
Especialista en Reproducción Asistida
Actualizado: 23/01/2010

En el artículo científico “Vitrificación vs Congelación de óvulos” se comparan dos métodos de preservación de los ovocitos, uno lento (congelación lenta) y otro ultrarrápido (vitrificación), en relación a la supervivencia de los ovocitos, la tasa de fecundación, el desarrollo de los embriones tras ser fecundados, la formación del huso meiótico en los ovocitos y su alineamiento cromosómico.

Los protocolos que se siguieron para realizar la congelación y descongelación lenta modificada de los ovocitos, o bien la vitrificación y desvitrificación de los ovocitos se relata a continuación:

Ovocitos congelados

Congelación – Descongelación lenta modificada ovocitaria

Congelación lenta modificada

Este método se basa en el método de congelación de Fabbri y colaboradores, para lo cual, tras denudar los ovocitos se introdujeron en medio de fluido tubárico humano (HTF) suplementado que contenía una concentración de 1,5 M de 1,2-propanodiol (PROH).

De ahí, se transfirieron durante10 minutos al medio de congelación, compuesto de 1,5M PROH y 0,3 M de sacarosa.

Los ovocitos se dividieron en grupos de 2 o de 3 y se cargaron en pajuelas que se termosellaron y se colocaron en un congelador programable a 25ºC, donde se irían enfriando poco a poco siguiendo los siguientes pasos:

  • Enfriamiento donde se baja la temperatura 2ºC cada minuto.
  • Cuando llega a 7ºC bajo cero se realiza el “seeding” manual y se mantienen a – 7ºC durante 10 minutos.
  • Se prosigue con el enfriamiento disminuyendo la temperatura 0,3ºC por minuto hasta llegar a los – 33ºC.
  • Se sumergen en nitrógeno líquido a – 196ºC.

Descongelación lenta modificada

Se extrajeron las pajuelas y se siguió el siguiente protocolo:

  • Se dejaron a temperatura ambiente 40 segundos.
  • Se sumergieron a 31ºC en un baño maría durante 60 segundos.
  • Se fueron lavando-hidratando de forma secuencial, para eliminar los restos de crioprotector.
  • Se mantuvieron en medio HTF en el incubador a 37ºC durante 2-3 horas antes de microinyectarlos (ICSI).

Ovocitos vitrificados

Vitrificación – Desvitrificación ovocitaria

Vitrificación

Para proceder a la vitrificación de los ovocitos, se realizaron los pasos siguientes:

  • Se sumergieron en un medio de equilibrio, compuesto por etilenglicol (EG) y PROH (al 7,5% v/v) durante 5 minutos.
  • Se transfirieron a medio de vitrificación entre 45-60 segundos, compuesto por EG y PROH (al 15% v/v) y 0,5 M de sacarosa.
  • Se cargaron en las “cucharas” especiales para ello y se sumergieron directamente en nitrógeno líquido.
  • Se mantuvieron durante un mes vitrificados.

Desvitrificación

Se usó la misma casa comercial que para la vitrificación y se hizo lo siguiente:

  • Se introdujo la cuchara durante 1 minuto a 37º C en 1 M de sacarosa, pasando por 3 concentraciones diferentes de la misma, de forma decreciente, durante 3 minutos cada uno (1 M, 0’50 M y 0’25 M).
  • Los ovocitos se pasaron a un medio de lavado, dos veces seguidas.
  • Tras las 2-3 horas de cultivo, se examinó la integridad de la membrana y los ovocitos intactos se microinyectaron (ICSI).
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2 Comentarios

  1. Oscar dice:

    Tras leer esto parece que es más seguro realizar una vitrificación de óvulos frente a una congelación.
    Gracias por la información profesional que brindan a todos aquellos que intentamos comprender un poco más sobre la complejidad de todos estos procesos y técnicas.

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