Protocolos de congelación de óvulos

La criopreservación de óvulos es un proceso por el cual estas células se congelan a bajas temperaturas, a -196ºC en nitrógeno líquido, para poder conservarlas sin afectar a su viabilidad y almacenarlas por un tiempo indefinido.

A continuación tienes un índice con todos los puntos que vamos a tratar en este artículo.

Al congelarlos, todas las reacciones biológicas y bioquímicas quedan detenidas en el mismo estado en el que estaban antes de su congelación.

¿Para qué sirven los protocolos de congelación de óvulos?

Sin embargo, la congelación de ovocitos no es sencilla, ya que se presentan múltiples problemas como:

  • El enfriamiento entre 15ºC y -5ºC: punto crítico al que empieza a producirse el daño celular. Se ven afectados principalmente los lípidos de membrana, que pueden sufrir un daño irreversible y los microtúbulos del huso meiótico.
  • Formación de hielo entre -5 y -80ºC: los cristales de hielo dañan la estructura de la membrana celular, principalmente durante descongelación, comprometiendo la viabilidad celular.
  • Criofractura: la solidificación del medio puede dañar al óvulo por criofractura entre los -50 y los -150ºC, viéndose afectada especialmente la zona pelúcida.
  • Efecto de soluto: con la deshidratación de la célula aumenta la concentración de solutos, que afecta a la estabilidad de la membrana celular, resultando letal para la célula.

Los protocolos de criopreservación pretenden minimizar estos efectos mediante la utilización de crioprotectores (permeables y no permeables) y controlando la temperatura.

El uso de crioprotectores permeables ayuda a contrarrestar el efecto de las altas concentraciones de solutos e impiden la formación de hielo en el citoplasma, aunque estas moléculas pueden resultar tóxicas para la célula.

Congelación lenta de óvulos

La congelación lenta es un protocolo que se ha utilizado de forma tradicional en los laboratorios de fecundación in vitro pero que ha sido sustituido por la vitrificación, principalmente por los buenos resultados de este método novedoso en la congelación y descongelación de blastocistos y óvulos.

Con la congelación lenta hay una muy baja tasa de supervivencia de los óvulos y los que sobreviven tienen un limitado potencial de implantación y de producir embarazo debido al daño que han podido sufrir durante el proceso.

El proceso de congelación lenta requiere que los ovocitos se coloquen en pajuelas que se sellan térmicamente. Éstas se colocan en un congelador programable a 25ºC, donde se van enfriando poco a poco en los siguientes pasos:

  • Enfriamiento donde se baja la temperatura 2ºC cada minuto.
  • Cuando llega a -7ºC se realiza el “seeding” manual (se toca con una varilla metálica especial) y se mantienen a – 7ºC durante 10 minutos.
  • Se prosigue con el enfriamiento disminuyendo la temperatura 0,3ºC por minuto hasta llegar a los -33ºC.
  • Se sumergen en nitrógeno líquido a -196ºC.

Para descongelar las pajuelas, se extraen del nitrógeno líquido y se sigue el siguiente protocolo:

  • Se dejan a temperatura ambiente 40 segundos.
  • Se sumergen a 31ºC en un baño maría durante 60 segundos.
  • Se rehidratan de forma secuencial, para eliminar los restos de crioprotector y que recuperen la estructura normal.
  • Se mantienen en un medio especial en un incubador a 37ºC antes de microinyectarlos (ICSI).

Usando esta técnica de criopreservación con los ovocitos hay elevados riesgos, ya que es una célula muy grande y esto tiene sus desventajas. El primer problema que puede surgir es la cristalización, ya que los óvulos contienen mucha agua en su interior y es mayor la probabilidad de que ocurra debido a su tamaño.

Otros problemas que pueden surgir son la despolimerización del huso meiótico al disminuir la temperatura y que los crioprotectores no se distribuyan uniformemente en el ovocito.

Vitrificación de óvulos

La vitrificación es una congelación con una velocidad de enfriamiento ultrarápida, una concentración de crioprotectores elevada y un volumen de medio muy pequeño para la conservación de la muestra.

Con la vitrificación se evita la formación de cristales de hielo intra y extracelulares, y el daño por el descenso de temperatura al ocurrir la congelación de forma muy rápida, por lo que ofrece mayores tasas de supervivencia ovocitaria que la congelación lenta.

En la vitrificación se ha introducido la estrategia del “mínimo volumen”, que consiste en utilizar la mínima cantidad de medio de vitrificación posible. Gracias a ello se aumenta la velocidad de vitrificación y así no es necesario utilizar concentraciones tan altas de crioprotector y se reduce su toxicidad.

Para proceder a la vitrificación de los ovocitos, se realizan los pasos siguientes:

  • Se pasan los óvulos por unos medios de equilibrado con concentraciones crecientes de crioprotectores para deshidratarlos.
  • Se colocan los óvulos en un medio de vitrificación.
  • Se colocan los óvulos en un soporte de vitrificación (Cryotop u otro) con el menor volumen de medio de vitrificación posible.
  • Se sumerge el soporte en nitrógeno líquido a -196 ºC

El proceso de desvitrificación es el siguiente:

  • Se introduce la pajuela en medio de desvitrificación y los óvulos se van pasando por medios de equilibrado para rehidratar la célula y eliminar los crioprotectores.
  • Tras su cultivo en un medio especial, los ovocitos se microinyectan (ICSI).

Debido a las grandes ventajas de la vitrificación en la criopreservación de óvulos, ha sido posible establecer este método para el uso habitual en la clínica de fertilidad, permitiendo la creación de bancos de óvulos de donantes y la preservación de la fertilidad en mujeres con cáncer o para aquellas que quieren retrasar su maternidad.

Un comentario

  1. usuario
    Oscar

    Tras leer esto parece que es más seguro realizar una vitrificación de óvulos frente a una congelación.
    Gracias por la información profesional que brindan a todos aquellos que intentamos comprender un poco más sobre la complejidad de todos estos procesos y técnicas.

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