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Refrigeración de ovocitos durante doce horas

Laura Gil Aliaga
Laura Gil Aliaga
Especialista en Reproducción Asistida
Actualizado: 2/01/2011

Nacido tras doce horas de refrigeración.

Las técnicas de reproducción asistida tienen una secuencia en el tiempo. Por ejemplo, en una fecundación in vitro se han de tener ambos gametos en el laboratorio de embriología para la captación ovárica, se necesitan unas 35-36 horas tras la administración de la hCG para conseguir el máximo número de ovocitos maduros (metafase II) de cada paciente y cada ovocito al que se le observa el cuerpo polar será microinyectado unas tres horas más tardes tras la captación.

En algunos casos, puede pasar que por determinadas razones no pueda disponerse de la muestra de semen en fresco el día de la captación ovocitaria y es por esto, que si se prevé que pueda llegar a pasar se organice el almacenaje de la muestra biológica congelada para evitar un problema.

Por el contrario, si esto no se ha previsto y no hay muestra almacenada, lo ideal es que el laboratorio decida si prolongar un poco el tiempo de la microinyección o bien que decida criopreservar los ovocitos para cuando el paciente se encuentre en condiciones de recoger una muestra de semen.

La prolongación de la microinyección en exceso es un hecho que el embriólogo no debería consentir puesto que puede tener consecuencias tales como el endurecimiento de la pelúcida, la activación partenogenética, la incapacidad de desarrollo del embrión y cambios en la alineación de los cromosomas, las cuales han sido demostradas en los ovocitos de ratones.

Un ovocito madurado tras la captación puede producir anormalidades en la fertilización, como se ha podido demostrar en estudios de maduración in vitro.

Para evitar estos problemas, lo que puede hacerse es ralentizar su metabolismo refrigerando los gametos hasta la microinyección, puesto que esto disminuye la actividad metabólica del zigoto por exposición a 4ºC hasta las 36 horas, consiguiendo después un alto grado de llegada a blastocisto, según lo que se ha observado en estudios animales.

Según nuestro conocimiento, en ovocitos humanos no hay ningún estudio realizado puesto que en el laboratorio de rutina se realiza la criopreservación ovocitaria y embrionaria y con las nuevas alternativas introducidas se ha conseguido hasta un 97% de supervivencia, lo que ha superado con creces las tasas de supervivencia en congelación lenta.

Este artículo da cuenta de un nacimiento tras la refrigeración de los ovocitos durante 12 horas, antes de su microinyección.

Onder Coban, B.S., a Oguzhan Hacifazlioglu, B.S., a H. Nadir Ciray, M.D., Ph.D., b Ulun Ulug, M.D.,b H. Ibrahim Tekin, M.D.,a and Mustafa Bahceci, M.D. b

a Cyprus IVF Center, Famagusta, Cyprus; and
b Bahceci Women’s Health Care Center, Istanbul, Turkey

Una mujer de 58 años y su marido de 60 años, se remitieron al programa de donación de óvulos. La pareja poseía en su historial reproductivo una microinyección espermática con óvulos de donante en otro centro de reproducción asistida anteriormente, tras el cual nació su primer hijo.

Puesto que el marido tenía una vasectomía hecha, la obtención de los espermatozoides se hace a través de una aspiración procedente del epidídimo para el proceso actual.

La donante apropiada para la pareja se preparó con un protocolo de Antagonistas de la GnRH. Se iniciaron los inyectables de gonadotropinas en el día +2 de su ciclo con dosis de 150-300 IU. Cuando el folículo de mayor tamaño alcanzó los 14 mm, se le aplicó a la donante los 0,25 mg de ganirelix, la cual se siguió administrando una vez al día, hasta el día de la administración de la hCG.

El protocolo de actuación de la donante, fue el de una pauta fija de gonadotropinas durante los primeros cuatro días y a partir del quinto, las dosis se ajustaban según la respuesta ovárica de la paciente.

Junto con el antagonista, se administró también una dosis de 75 IU por día de gonadotropina menopausica humana y cuando al menos dos de los folículos alcanzaron los 19 mm de tamaño, se administró una dosis de 10.000 IU por vía intramuscular de hCG, para desencadenar la ovulación y tras 35 horas se realizó la captación ovocitaria.

La preparación endometrial de la receptora se realizó a base de estradiol, mediante un sistémica terapéutico transdérmico, el cual se inició con una dosis de 2 mg en el día dos del ciclo que se fue incrementando gradualmente cada dos días

La progesterona se sumó a la medicación en el día 15 del ciclo y los embriones fueron transferidos en el día 18 del mismo. La pareja tenía que viajar al extranjero puesto que la clínica donde se hicieron el tratamiento de ovodonación no se encontraba en su país.

La pareja llegó dos horas antes de hacerle la punción folicular a la donante. Sin embargo, la donante se había inyectado la hCG horas antes de lo que estaba previsto y por eso, hubo que hacer la captación de los mismos 12 horas antes de la llegada de los pacientes receptores.

En ese momento, en la clínica donde se realizaba el proceso la vitrificación no la realizaban con mucha soltura, puesto que las tasas de supervivencia de los ovocitos no eran buenas, por no decir, que eran bastante regulares y por eso, los embriólogos consideraron el refrigerar los ovocitos hasta el momento de la microinyección, puesto que esto ralentizaría el metabolismo celular y con eso se prolongaría la viabilidad celular.

Tras la captación ovocitaria, se denudan 20 ovocitos, de los cuales 17 tenían cuerpo polar y estaban aptos para la microinyección, así que se distribuyeron en medio tamponado con bicarbonato, suplementado con suero sintético, en placas de cuatro pocillos, cubiertas con aceite mineral.

La placa se introdujo seguidamente en un refrigerador común (de aire) al cual se le fueron grabando las medidas de temperatura secuencialmente con un termómetro digital, durante todo el tiempo que estuvieron los ovocitos en su interior.

Antes de realizar todo este proceso, se pidió el consentimiento informado a los pacientes, para saber y tener documentado que aceptaban todo el proceso. La pareja de nuestra paciente se prestó para la obtención de la muestra de semen 11 horas después de la captación ovocitaria, obteniendo movilidad espermática, por lo que se preparó la muestra, se capacitó, mediante la técnica de los gradientes de densidad y lavado subsecuente en solución tamponada con bicarbonato.

Se sacaron los ovocitos de la nevera justo en el momento de la microinyección. El citoplasma de los ovocitos estaba como un poco borroso, pero este detalle no afectaba en absoluto a la microinyección.

Tras la ICSI, los ovocitos se llevaron a un medio de cultivo secuencial y se incubaron con un 5,5% de CO2 y un 5% O2.

El cultivo embrionario se llevó a cabo en microgotas de 30 ml cubiertas con aceite. A las 16 horas, 14 ovocitos mostraban dos pronúcleos, tras cambiarles el medio de cultivo.

El cultivo se hizo hasta blastocisto puesto que los embriones se cultivaron 6 días, cambiándoles el medio de cultivo en el día +3. En el día +5 se transfirieron dos blastocistos de grado dos, con un catéter de transferencia Wallace de forma ecoguiada y la vejiga de la receptora llena. Se congelaron un total de 6 blastocistos sobrantes para un uso posterior.

Tras doce días pos-transferencia, el test de embarazo dio positivo y tras 38 semanas de embarazo, la paciente dio a luz a un bebé sano de 2,800g.

DISCUSIÓN

En este artículo se demuestra que retrasando la ICSI hasta 12 horas no se dañan los ovocitos si está refrigerados. La microinyección tras mínimo unas horas, hasta 8 horas después de haber extraído el cuerpo polar, acaba resultando con unas tasas de fertilización altas y una buena calidad embrionaria.

La incubación prolongada de los ovocitos en metafase II hasta un máximo de 8 horas, no compromete ni las tasas de fertilización, ni de embarazo. El plazo máximo de retraso entre la captación y la microinyección sin que interfiera en el resultado, documentado, han sido de 16 horas.

El nacimiento de un bebé tras la transferencia de dos blastocistos obtenidos tras refrigerar los ovocitos, puede ofrecer una alternativa para almacenamientos a corto plazo de gametos femeninos al almacenaje por largos periodos de tiempo.

Precisamente porque la refrigeración de los gametos es un procedimiento simple requiere estudios más profundos y exhaustivos al respecto.

Fuente: Fertility and Sterility, vol. 94, pp.2769 e5- 2769 e7, 2010

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