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Congelación de óvulos
Sábado, 23 de Enero de 2010, Laura Gil Aliaga
PROTOCOLOS DE CONGELACIÓN LENTA MODIFICADA Y VITRIFICACIÓN
En el artículo científico “Vitrificación vs Congelación de óvulos” se comparan dos métodos de preservación de los ovocitos, uno lento (congelación lenta) y otro ultrarrápido (vitrificación), en relación a la supervivencia de los ovocitos, la tasa de fecundación, el desarrollo de los embriones tras ser fecundados, la formación del huso meiótico en los ovocitos y su alineamiento cromosómico.
Los protocolos que se siguieron para realizar la congelación y descongelación lenta modificada de los ovocitos, o bien la vitrificación y desvitrificación de los ovocitos se relata a continuación:
CONGELACIÓN-DESCONGELACIÓN LENTA MODIFICADA
▬ CONGELACIÓN LENTA MODIFICADA ▬
Este método se basa en el método de congelación de Fabbri y colaboradores, para lo cual, tras denudar los ovocitos se introdujeron en medio de fluido tubárico humano (HTF) suplementado que contenía una concentración de 1,5 M de 1,2-propanodiol (PROH).
De ahí, se transfirieron durante10 minutos al medio de congelación, compuesto de 1,5M PROH y 0,3 M de sacarosa.
Los ovocitos se dividieron en grupos de 2 o de 3 y se cargaron en pajuelas que se termosellaron y se colocaron en un congelador programable a 25ºC, donde se irían enfriando poco a poco siguiendo los siguientes pasos:
I) Enfriamiento donde se baja la temperatura 2ºC cada minuto.
II) Cuando llega a 7ºC bajo cero se realiza el “seeding” manual y se mantienen a - 7ºC durante 10 minutos.
III) Se prosigue con el enfriamiento disminuyendo la temperatura 0,3ºC por minuto hasta llegar a los - 33ºC.
IV) Se sumergen en nitrógeno líquido a - 196ºC.
▬ DESCONGELACIÓN LENTA MODIFICADA ▬
Se extrajeron las pajuelas y se siguió el siguiente protocolo:
I) Se dejaron a temperatura ambiente 40 segundos.
II) Se sumergieron a 31ºC en un baño maría durante 60 segundos.
III) Se fueron lavando-hidratando de forma secuencial, para eliminar los restos de crioprotector.
IV) Se mantuvieron en medio HTF en el incubador a 37ºC durante 2-3 horas antes de microinyectarlos (ICSI).
VITRIFICACIÓN-DESVITRIFICACIÓN
▬ VITRIFICACIÓN ▬
Para proceder a la vitrificación de los ovocitos, se realizaron los pasos siguientes:
1) Se sumergieron en un medio de equilibrio, compuesto por etilenglicol (EG) y PROH (al 7,5% v/v) durante 5 minutos.
2) Se transfirieron a medio de vitrificación entre 45-60 segundos, compuesto por EG y PROH (al 15% v/v) y 0,5 M de sacarosa.
3) Se cargaron en las “cucharas” especiales para ello y se sumergieron directamente en nitrógeno líquido.
4) Se mantuvieron durante un mes vitrificados.
▬ DESVITRIFICACIÓN ▬
Se usó la misma casa comercial que para la vitrificación y se hizo lo siguiente:
1) Se introdujo la cuchara durante 1 minuto a 37º C en 1 M de sacarosa, pasando por 3 concentraciones diferentes de la misma, de forma decreciente, durante 3 minutos cada uno (1 M, 0′50 M y 0′25 M).
2) Los ovocitos se pasaron a un medio de lavado, dos veces seguidas.
3) Tras las 2-3 horas de cultivo, se examinó la integridad de la membrana y los ovocitos intactos se microinyectaron (ICSI).
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2 comentarios »
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Tags:alineamiento cromosómico, baño maría, congelación óvulos, congelación lenta modificada, congelador, congelador programable, crioprotector, desarrollo embrionario, descongelación óvulos, descongelación lenta modificada, desvitrificación, EG, embriones, enfriamiento, etilenglicol, Fabbri, fecundación, fluido tubárico, HTF, huso meiótico, incubador, medio de congelación, medio de equilibrio, medio de lavado, medio de vitrificación, nitrógeno líquido, ovocitos, pajuelas, preservación óvulos, PROH, propanodiol, sacarosa, seeding, supervivencia ovocitos, vitrificación
[...] Congelación de óvulos [...]
Tras leer esto parece que es más seguro realizar una vitrificación de óvulos frente a una congelación.
Gracias por la información profesional que brindan a todos aquellos que intentamos comprender un poco más sobre la complejidad de todos estos procesos y técnicas.