El cultivo largo de embriones y la clasificación de blastocistos

En los últimos años está cobrando especial relevancia el cultivo largo hasta blastocisto en los tratamientos de fecundación in vitro (FIV) debido a que se obtienen mejores tasas de implantación con las transferencias de blastocistos (día 5-6 de desarrollo) que de embriones en estadios más tempranos.

Una de las principales ventajas es que permite mejorar la selección embrionaria. Para ello, se clasifican los blastocistos en función de su calidad morfológica y su grado de expansión, es decir, en qué estadio del desarrollo se encuentran: blastocisto temprano, cavitado, expandido, eclosionado, etc.

En el siguiente vídeo, la embrióloga Silvia Azaña nos habla sobre el cultivo largo de embriones y la clasificación de blastocistos. No obstante, luego puedes profundizar con más detalle leyendo el artículo.

A continuación tienes un índice con todos los puntos que vamos a tratar en este artículo.

¿Qué es el cultivo largo a blastocisto?

El cultivo largo embrionario consiste en mantener a los embriones en el laboratorio hasta el día 5 o 6 de su desarrollo, cuando alcanzan el estadio de blastocisto. A lo largo de estos días, los embriones están en el interior de un incubador, con las condiciones adecuadas que favorecen su desarrollo.

Cultivo largo a blastocisto

En los blastocistos podemos diferenciar claramente dos estructuras, es decir, es posible distinguir:

Trofoectodermo

son las células del blastocisto que se ponen en contacto con el endometrio y, posteriormente, esta estructura originará la placenta. En el exterior, está protegido por la zona pelúcida.

Masa celular interna

se encuentra en el interior del trofoectodermo y dará lugar al feto.

Partes del blastocisto

Cuando el embrión se implanta de forma natural en el endometrio, se encuentra en estadio de blastocisto. Si el desarrollo embrionario se realiza en el laboratorio de FIV, para que el embrión alcance el estadio de blastocisto, deberá ser mantenido en unas condiciones de cultivo óptimas para que, entre otros factores, sea de buena calidad e implante al ser transferido al útero materno.

Tipos de cultivo para el desarrollo in vitro

El cultivo largo a blastocisto puede realizarse con dos tipos de medios de cultivo. A continuación, se detalla cada modelo de cultivo para el desarrollo embrionario in vitro.

Cultivo secuencial

Para conseguir alcanzar el estadio de blastocisto, los embriones son cultivados en dos medios con composiciones químicas diferentes que se adaptan a los requisitos nutricionales de los embriones en cada momento de su desarrollo.

¿Cómo es el cultivo secuencial de los embriones?

Por esta razón, los embriones se cultivarán en el primer medio desde su estadio de cigoto (día 1) hasta el día 3 de desarrollo. Una vez trascurrido este tiempo, los embriones pasarán a otro medio de cultivo hasta el estadio de blastocisto (día 5-6).

Cultivo con medio global

En este caso, los embriones solamente se cultivan en un tipo de medio donde se encuentran todos los nutrientes que necesitan desde el día 1 de desarrollo hasta que son transferidos o vitrificados en el día 5 o 6, cuando han alcanzado el estadio de blastocisto.

Clasificación de los blastocistos

Uno de los métodos más utilizados para predecir el potencial de implantación de los blastocistos es la valoración morfológica. Gracias a ella, podemos clasificar los embriones en función de su calidad.

Para realizar la clasificación embrionaria, se evalúan el grado de expansión, la masa celular interna (MCI) y el trofoectodermo. Además, es necesario que se haya desarrollado el blastocele para poder observar las estructuras fácilmente.

Según estos tres parámetros, la manera tradicional de clasificar los blastocistos consiste en asignar un número (1-5) y dos letras (A-D), en función del grado de expansión, la calidad de la MCI y del trofoectodermo, respectivamente. Por ejemplo, siguiendo el criterio que explicaremos a continuación, un blastocisto expandido de buena calidad sería clasificado como 3AA.

Grado de expansión

Las categorías numéricas asignadas según la expansión del blastocisto son las siguientes:

Grado 1 o blastocisto temprano (BT)

el blastocele empieza a visualizarse.

Grado 2 o blastocisto cavitado (BC)

ya es posible distinguir el trofoectodermo y la MCI.

Grado 3 o blastocisto expandido (BE)

el blastocisto ha aumentado su tamaño y la capa que lo recubre, la zona pelúcida, es más fina.

Grado 4 o blastocisto iniciando eclosión (hatching, BHi)

el blastocisto empieza a salir de la zona pelúcida.

Grado 5 o blastocisto eclosionado (hatched, BH)

el blastocisto ya ha abandonado la zona pelúcida por completo.

Etapas del desarrollo de los blastocistos

Masa celular interna (MCI)

A la hora de evaluar la MCI, se tiene en cuenta su tamaño, el grado de compactación de las células y su apariencia. De esta forma, se puede establecer las siguientes categorías:

Categoría A

numerosas células compactadas.

Categoría B

numerosas células no compactadas.

Categoría C

pocas células.

Categoría D

células con signos de degeneración.

Trofoectodermo

En el caso del trofoectodermo, que debe tener una única capa, se evalúa su apariencia y, en función de ello, se asigna:

Categoría A

homogéneo, cohesionado y con muchas células.

Categoría B

homogéneo y con menos células.

Categoría C

pocas células.

Categoría D

células con signos de degeneración.

Cabe destacar que la Asociación para el Estudio de la Biología de la Reproducción (ASEBIR) ha establecido una clasificación de los embriones en día 5 de desarrollo y proporciona prioridad al trofoectodermo respecto de la masa celular interna. Por tanto, únicamente se utilizaría una letra.

¿Cuándo está indicado el cultivo largo de embriones?

El cultivo largo no se realiza en todos los casos, ya que puede depender de varios factores. Por ejemplo, el cultivo largo de embriones se suele recomendar especialmente en las siguientes situaciones:

• Ciclos de FIV en los que el número de embriones de buena calidad es alto en el tercer día de desarrollo.
• Casos de fallos repetidos de implantación.
• Pacientes en que se realiza test genético preimplantacional (PGT, antes conocido como DGP).
• Pacientes de edad materna avanzada.
• Pacientes con abortos de repetición.
• Casos en los que deben evitarse especialmente las gestaciones múltiples.
• Optimización de los ciclos de vitrificación, ya que si se espera hasta el estadio de blastocisto para congelar los embriones, solamente se congelarán los mejores.

Indicaciones del cultivo largo de embriones

Por ello, es de vital importancia evaluar cada paciente de forma personalizada y tener en cuenta el número de embriones disponibles.

Ventajas e inconvenientes

El cultivo a blastocisto va a permitir unas mejores tasas de éxito de los tratamientos de fecundación in vitro (FIV) debido a que:

• Aumenta la tasa de implantación gracias a que permite una mejor selección embrionaria.
• Permite una mejor sincronización entre el desarrollo del embrión y la receptividad endometrial.
• Disminuye el riesgo de gestación múltiple porque permite realizar transferencias de un único embrión sin empeorar las tasas de embarazo.

Ventajas del cultivo largo a blastocisto

No obstante, a pesar de que esta metodología ofrezca estas ventajas, no todas las pacientes pueden beneficiarse de ella debido a que presenta una serie de limitaciones:

• Muchos embriones se bloquean antes de llegar al estadio de blastocisto. Por tanto, existe el riesgo de que el día de la transferencia no haya ningún embrión para transferir.
• No en todos los laboratorios se consiguen buenos resultados con el cultivo largo.
• Es necesario un número elevado de óvulos/embriones disponibles para asegurar que el día de la transferencia habrá alguno.

Limitaciones del cultivo largo de embriones

Pese a ello, es imprescindible el análisis de todos los factores en conjunto y seguir las recomendaciones establecidas por los especialistas.

Preguntas de los usuarios

¿Un blastocisto temprano tiene menos posibilidad de implantar que un blastocisto tardío?

Aunque estadísticamente un blastocisto tardío puede presentar mayores probabilidades de implantación, la decisión debe basarse en la evaluación individual de cada paciente y embrión.
Leer más

¿Qué porcentaje de embriones que llegan a día 3 alcanzan el estadio de blastocisto?

Como sabemos el desarrollo embrionario tiene una duración de entre 5-6 días. Durante estos días el embrión va evolucionando a partir del ovocito fecundado, 1 célula hasta aproximadamente 150-200 células. En día 5-día 6 de desarrollo adquiere el estadio de blastocisto donde podemos observar dos estructuras bien diferenciadas, la masa celular interna, el grupo celular dentro de la cavidad embrionaria que dará lugar al feto y el trofoectodermo que es la capa celular que rodea a la masa celular interna y que se unirá al endometrio formando la placenta.

Aproximadamente entre el 40-60% de los embriones en desarrollo en día 3, donde tienen una cantidad de células entre 6 y 12, llegan a alcanzar el estadio de blastocisto. Si bien es cierto que la mayoría de los embriones generados se desarrollan hasta día 3 de cultivo donde el ovocito juega un papel fundamental a partir de día 3 se activa el genoma embrionario y es el propio embrión el que dirige su desarrollo.

Muchos de los embriones no continúan su desarrollo de día 3 a día 5. Por eso, el desarrollo hasta día 5 de desarrollo es en sí un proceso de selección embrionaria. Muchas veces tenemos en día 3 embriones preciosos que transferiríamos y al dejarlos en cultivo vemos que quedan detenidos en su desarrollo y no hubieran conseguido nunca el embarazo de haberlos transferido.

Los embriones que llegan a estadio de blastocisto tienen mayor probabilidad de implantación. Es importante también tener en cuenta que actualmente tanto los medios de cultivo como los sistemas de incubación y un buen programa de cultivo a blastocisto en el laboratorio nos permite realizar este tipo de selección in vitro.

¿El cultivo largo de embriones mejora la calidad de los mismos?

Rocío Díaz, directora y embrióloga en el laboratorio de Next Fertility Sevilla, nos responde en este vídeo:

No necesariamente. No porque llevemos un cultivo prolongado de un embrión nos va a mejorar la calidad, aunque si es verdad a veces que un embrión que lleva una calidad media hasta día 3, puede formar un blastocisto que sea catalogado como tipo A o de alta calidad. Y también al revés. A partir del día 3 un embrión puede, incluso, quedar parado, ir degenerando y disminuir su calidad, aunque fuera uno de alta calidad en día 3 y no podamos ni siquiera vitrificarlo en día 5 con blasto.

¿Tengo elevada probabilidad de embarazo con un blastocisto de calidad C?

Desconocemos la edad de la paciente y si al embrión le han realizado diagnóstico genético perimplantacional (DGP), pero pasamos a explicar la probabilidad de embarazo en función de diferentes variables:

• La edad de la paciente cuando se generaron los blastocistos: normalmente las edades inferiores a 35 años nos dan las tasas de embarazo mas elevadas. Esto permite que la donación de óvulos (edad de las donante menor de 35 años según marca la ley) presente unas tasas de embarazo acumuladas cercanas al 90%.
• PGT-A oTest genético perimplantacional de aneuploidias: permite una selección de los embriones más eficaz que la clasificación por la morfología . Este test es capaz de decirnos que embriones no se implantarán, por lo tanto puede hacer que tengamos las misma tasa de embarazo en una mujer de 40 años que en una de 35, puesto que cuando transferimos un embrión será un embrión sano.
• Clasificación morfológica: los embriones se clasifican por la morfología (por su forma), como se han ido dividiendo, según la fragmentación (fragmentos celulares que se producen en la división de células) y como está la masa celular interna (futuro embrión y el trofoectodermo que dará lugar a la placenta). Normalmente, los embriones se clasifican con dos letras, eso determina el potencial de implantación. Cabe destacar que cada laboratorio posee sus resultados en función del tipo de embrión.

¿Por qué hay embriones que no llegan a blastocisto?

El bloqueo embrionario es el término que se utiliza para hacer referencia a que los embriones no han sido capaces de formar un blastocisto. Normalmente son embriones que suelen detener su desarrollo en día +3/4 en el estadio de células/mórula.

Aproximadamente entre un 50-60% de los embriones tienen la capacidad de llegar a blastocisto, los embriones que no lo consiguen sufren el llamado arresto embrionario. Una mala calidad ovocitaria y seminal puede ser motivo de bloqueo de los embriones. Por ejemplo, se ha visto que la fragmentación del DNA espermático tiene un efecto negativo sobre el desarrollo embrionario, produciendo una evolución más lenta de los embriones y relacionándose negativamente con el arresto embrionario.

Otro de los factores a tener en cuenta es la edad del ovocito. Sabemos que la presencia de anomalías cromosómicas en el ovocito aumenta con la edad de la mujer, influyendo sobre la carga genética embrionaria y por tanto su desarrollo. Además, hay estudios que demuestran que una de las principales causas del arresto embrionario es la presencia de anomalías cromosómicas en las células del embrión. Concretamente, se ha visto que casi un 70% de los embriones que no forman el blastocisto presentan anomalías cromosómicas.

Los avances y las nuevas tecnologías han permitido que los embriones puedan cultivarse hasta día +6 del desarrollo embrionario. El cultivo largo nos permite seleccionar los embriones que tienen la capacidad de formar el blastocisto en día +5/+6 y, por tanto, nos permite una mejor selección embrionaria. No será hasta el día +3 del cultivo cuando el embrión active el genoma embrionario, esta activación es fundamental para que los embriones lleguen al estadio de blastocisto.

¿En qué pacientes se recomienda el cultivo largo?

Si fuese posible, lo ideal sería realizarlo siempre. A lo largo de 5-6 días de cultivo, vamos a valorar todos los eventos embrionarios que deben ir sucediendo (divisiones, compactación, blastulación etc.), éstos nos permiten una mejor selección embrionaria, que se traduce en una mayor tasa de implantación y embarazo. Si además a este cultivo le aplicamos la tecnología time-lapse, obtendremos más información para una selección embrionaria aún mejor.

¿Qué tasas de embarazo se consiguen con el cultivo largo?

Hablamos de cultivo largo cuando dejamos los embriones en nuestros incubadores hasta el día 5-6 de desarrollo embrionario, es el llamado estadio de blastocisto. De esta manera, conseguimos seleccionar más exhaustivamente los embriones. El hecho de llegar a este día significa que el embrión tiene más posibilidades de embarazar, ya que ha aguantado más tiempo en el laboratorio. Las tasas de embarazo son dependientes de la edad.

¿Qué diferencia hay entre blastocisto y blastocele?

Un blastocisto es un embrión en día 5 de desarrollo embrionario. Para que se forme el blastocisto tiene que producirse la cavitación. Este proceso permite diferenciar las dos estructuras principales del blastocisto, la masa celular interna y el trofoectodermo. Y la cavidad central llena de líquido característica de los blastocistos es el blastocele.
Leer más

¿Qué es un embrión hatching?

Marta Barranquero, embrióloga en Reproducción Asistida ORG, nos cuenta en este vídeo el significado de un embrión hatching:

Los embriones en estadio de blastocisto, es decir, en día 5 de desarrollo se clasifican teniendo en cuenta el grado de expansión y las características de la masa celular interna (MCI) y el trofoectodermo.

Si nos centramos en el grado de expansión, el grado 4 o blastocisto iniciando la eclosión es lo mismo que decir blastocisto hatching. Esto significa que el blastocisto ha comenzado a salir de la zona pelúcida.

En cambio, si el grado de expansión del blastocisto fuera el 5, se trataría de un blastocisto eclosionado que ya ha abandonado la zona pelúcida por completo. En este caso, se llamaría blastocisto hatched.

¿Un blastocisto de mala calidad también puede implantar?

Desde el laboratorio de fecundación in vitro solo se va a decidir llegar a la transferencia embrionaria si hay embriones viables para transferir. Estos embriones viables pueden ser de mejor o de peor calidad. Un embrión de calidad A o B tendrá más posibilidades de implantar que un embrión de calidad C. Pero el embrión de calidad C puede implantar y dar lugar a una gestación.
Leer más

¿Baja mucho la probabilidad de embarazo con blastos de una categoría a otra?

Marta Barranquero, embrióloga en Reproducción Asistida ORG, nos cuenta en este vídeo los cambios en la probabilidad de embarazo según la categoría del blastocisto:

Los blastocistos se clasifican teniendo en cuenta su grado de expansión, su masa celular interna y su trofoectodermo. En función de ello, se asigna un número y dos letras respectivamente. Por tanto, cuando hablamos de un blastocisto A.A nos estamos refiriendo a un blastocisto cuya masa celular interna contiene numerosas células compactadas y un trofoectodermo homogéneo, cohesionado y con muchas células. En este caso, estaríamos hablando de un blastocisto de calidad óptima y con una alta probabilidad de implantar en el útero y, por tanto, dar lugar a un embarazo.

En el caso de un blastocisto de calidad B, es verdad que su categoría es algo inferior respecto de la anterior, pero la probabilidad de dar lugar a ese embarazo sigue siendo bastante buena.

En cambio, si hablamos de un blastocisto de calidad D, su categoría es muy bajita al igual que su probabilidad de implantar en el útero.

Lecturas recomendadas

Si deseas saber más detalles sobre el cultivo embrionario que se lleva a cabo en los laboratorios de fecundación in vitro (FIV), te recomendamos que leas el siguiente artículo: Cultivo de embriones en el laboratorio de fecundación ‘in vitro’ (FIV).

También puedes encontrar más información sobre si es mejor realizar la transferencia embrionaria en día 3 de desarrollo o día 5 si accedes a este enlace: ¿Cuándo hacer la transferencia de embriones? ¿En día 3 o en día 5?

Bibliografía